北京六一电泳小知识-电泳

电泳
电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。


 


影响泳动度的因素

1. 电场强度：

电场强度是指每厘米的电位降，也称电位梯度(电势梯度)。根据电场强度的不同，电泳可分为： 常压电泳。分离时间较长，从数小时到数十小时 ，适合于分离蛋白质等大分子物质。如我厂生产的 6C、 8C等 高压电泳。电泳时间很短，有时只需几分钟。多用于分离氨基酸、多肽、核苷酸、糖类等小分子物质。
2 溶液的性质

1)PH值

溶液的PH决定带电颗粒的解离程度，也即决定其带静电荷的量。对蛋白质而言，溶液pH值离等电点越远，则颗粒所带的净电荷越多，泳动速度也越快；反之，则越慢。因此分离某种蛋白质混合液时，应选择合适的pH,使欲分离的各种蛋白质所带的电荷数量有较大的差异

2)离子强度

溶液的离子强度，电泳较合适。若离子强度过高，则会降低颗粒泳动速度；若离子强度过低，则缓冲能力差，往往会因为溶液PH值的变化而影响泳动度的速率


3)溶液黏度

泳动度与溶液黏度是成反比关系

3 颗粒性质

颗粒直径、形状以及所带静电荷量对泳动度有较大的影响。一般来说，颗粒的静电荷量越大，或其直径越小，或其形状越接近球形，在电场中的泳动速度就越快。反之，则越慢

4 电渗

电泳缓冲液相对于固体支持物的移动称电渗。常会因为支持物上存在的离子基团如羧基、羟基等吸附电极溶液中的正离子，使靠近支持物的溶液层相对带电，向负极移动，反之，若支持物的离子基团吸附溶液中的负离子，则溶液层向正极移动。电渗作用会影响颗粒的泳动度，因此，在电泳时，电渗小些为好。


5 焦耳热 电泳时会产生焦耳热，使介质粘度下降，分子运动加快，迁移率增加，同时温度过高会使样品中的生物大分子变性失活，因此电泳时，要控制电压或电流，也可安装冷却散热装置。如我厂生产的DYCZ-24EN,DYCZ-24F,均具有冷却循环装置,可与WD-9412A型恒温循环器配套使用

Q=I2Rt

Q-释放出的热量，I-电流强度，R-电阻，t-电泳时间

6.支持物

现代电泳多在固体支持物上进行，使样品中的不同组分形成不同的区带，称区带电泳。电泳结束后，支持物可以方便地进行染色等后续处理。 对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测，透明，无紫外吸收。常用支持物有滤纸，醋酸纤维素薄膜，淀粉凝胶，琼脂糖凝胶等 支持物性质不同也会影响泳动速率，如琼脂糖和都有大小不同的筛孔，在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快，反之则慢。